小鼠尿素氮(BUN)ELISA試劑盒解析

　　實驗原理實驗

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠尿素氮(BUN)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠尿素氮(BUN)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，計算樣品濃度。

　　一、試劑盒核心參數(shù)對比?

　　檢測范圍?

　　典型范圍：60-1600 pmol/L(BALB/c小鼠樣本)?

　　其他方法：比色法試劑盒可達0.05-1 mmol/L(血清/血漿)?

　　靈敏度與精密度?

　　批內(nèi)CV≤5.0%，批間CV≤8.0%(酶聯(lián)速率法)?

　　超敏試劑盒可檢測pg/mL級濃度?

　　二、試劑盒組成與原理?

　　關(guān)鍵組分?

　　包被抗體?：小鼠抗BUN單抗包被微孔板?

　　酶標抗體?：HRP標記的BUN抗體(辣根過氧化物酶)?

　　底物系統(tǒng)?：TMB顯色液(最終顯黃色)?

　　檢測原理?

　　雙抗體夾心法?：抗原-抗體-酶標抗體復合物形成后顯色定量?

　　競爭法?：適用于小分子檢測(如激素)?

　　三、樣本處理與操作要點?

　　樣本要求?

　　類型?：血清、血漿(避免肝素抗凝劑干擾)?

　　保存?：-20℃避免反復凍融(含NaN?樣本禁用)?

　　操作步驟?

　　標準品稀釋?：需5倍梯度稀釋(如1600→800→400 pmol/L)?

　　溫育條件?：37℃ 30分鐘(封板膜密封)?

　　四、常見問題與解決方案?

　　顯色異常?

　　可能原因：底物失效或溫育時間不足。

　　處理：檢查試劑有效期，延長溫育至顯色穩(wěn)定?

　　背景值高?

　　可能原因：洗滌不凈或非特異性結(jié)合。

　　處理：增加洗滌次數(shù)(≥3次)?

　　注：不同品牌試劑盒參數(shù)可能差異較大，建議以實際說明書為準。

　　注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。 ELISA試劑盒

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