ELISA實驗中關于跳孔、信號變化的疑問及回答

　　以下是天正信達對ELISA實驗中關于跳孔(Drift)和信號變化的常見疑問及專業解答，綜合實驗操作要點和故障排查經驗整理：

　　一、跳孔(Drift)問題解析

　　試劑配制中斷的影響?

　　中斷可能導致標準曲線波動，建議在15-20分鐘內完成配制并加樣(除非說明書特別說明)

　　未平衡的試劑會因溫度不均導致孔間信號變異，需室溫平衡30分鐘

　　移液器選擇?

　　底物或酶結合物等試劑推薦使用多道移液器，確保加樣一致性

　　蓋板使用規范?

　　需按說明書要求使用配套蓋板，邊緣不契合會導致信號差異

　　酶標儀設置?

　　讀數時間超過2秒/孔會因反應延遲導致OD值變異，建議設為1秒/孔

　　孵育時間調整?

　　擅自更改時間或溫度會導致反應失衡，需嚴格遵循說明書

　　二、信號變化異常原因與對策

　　底物處理問題?

　　混合后的底物需15分鐘內使用(化學發光底物4小時內)，過早混合可能變色

　　凍干底物需按說明書溶解，避光保存

　　顯色異常類型?

　　白板(無顯色)?：可能因漏加酶標抗體、底物失效或洗滌液誤用終止液

　　顯色弱?：試劑未平衡、孵育溫度不足或HRP污染導致

　　顯色過快?：酶標抗體過量或底物接觸金屬器械

　　背景信號控制?

　　高背景多因洗滌不(需浸泡1分鐘/次)或封閉不充分(延長至1-2小時)

　　鏈霉親和素-HRP過量需調整稀釋比例

　　三、關鍵操作建議

　　加樣順序?：嚴格按說明書步驟，避免交叉污染

　　環境控制?：顯色階段需避光，溫度穩定在22-25℃

　　質控設置?：每板需設陰陽性對照及復孔，CV%應<15%

　　若問題持續，建議檢查試劑有效期、校準移液器，并聯系廠商獲取批次特異性數據。

　　注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術老師或品牌供應商。

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