BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)

　　產品描述

　　BCA Protein Assay Kit是一種即用型的Western blot相關總蛋白分析試劑，可通過測量562nm處的吸光度并與蛋白標準物的吸光度-濃度曲線進行比較，快速測定總蛋白濃度。蛋白質定量過程可以在45分鐘內完成。

　　基于BCA (Bicin -choninic Acid) 法研制而成，實現了對蛋白質進行快速、穩定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環境下蛋白質分子中的肽鏈結構能與Cu2+絡合生成絡合物。同時將Cu2+還原成Cu+。該測定法的紫色反應產物是由兩個BCA分子與一個亞銅離子螯合形成的。 這種水溶性復合物在562nm處表現出很強的吸光度，在較寬的工作范圍 (20-2,000μg/ ml) 中， 隨著蛋白質濃度的增加，吸光度幾乎呈線性。

　　BCA方法不是真正的端點方法，也就是說最終顏色會繼續變化。但是孵育后顏色變化的速度足夠慢可以允許分析大量的樣品。據報道蛋白質的大分子結構，肽鍵的數量以及四種特定氨基酸 (半pga、sas和las) 的存在與BCA的顏色形成有關。對二肽、三肽和四肽的研究表明顏色形成的程度不僅僅是由單個產生顏色的官能團的總和引起的。

　　因此通常參考諸如牛血清白蛋白 (BSA) 的常見蛋白質的標準來確定待測蛋白質濃度。從蛋白質制備一系列已知濃度的稀釋液，并與待測物一起進行測定，然后根據標準曲線確定每個待測物的濃度。如果需要精確定量待測蛋白質，建議選擇質量與待測蛋白質相似的蛋白質標準品。例如在測定免疫球蛋白樣品時，可以使用牛γ球蛋白 (BGG) 標準品。在介紹的兩種檢測法中，其中試管檢測法需要更大體積 (0.1mL) 的蛋白質樣品，但是由于它使用的樣品與工作試劑之比為1:20 (v / v)，因此干擾物質的影響降至低。

　　產品特性

　　組分500 tests2500 tests5000 tests

　　BCA Reagent A100 mL500 mL500 mL × 2

　　BCA Reagent B3 mL5 mL × 35 mL × 6

　　BSA Standards

　　2mg/mL1 mL × 41 mL × 102 mL × 10

　　使用方法

　　A.試管配制

　　1.以50:1的比例混合BCA試劑A和BCA試劑B。即將50ml BCA試劑A與1ml BCA試劑B混合。

　　注意: 使用以下公式確定所需工作試劑的總量： (標準品+待測樣品) x (重復次數) x (每個樣品所需要的BCA工作液) =所需BCA工作液總體積。

　　2.按照表1配制新的標準品體系。(用0.9% NaCl或PBS稀釋白蛋白 (BSA) 標準液)。

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